style="text-indent:2em;">各位老铁们好，相信很多人对后备母猪需要打水肿疫苗吗需要注意什么都不是特别的了解，因此呢，今天就来为大家分享下关于后备母猪需要打水肿疫苗吗需要注意什么以及rsv疫苗不建议接种的问题知识，还望可以帮助大家，解决大家的一些困惑，下面一起来看看吧！
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美国的疫情会失控吗
谢邀！众所周知美国是一个超级大国，不是夸大无论从军事国防武器经济各领域都是“世界大流氓”老大，综合实力第一。美国当前疫情累计确诊患者超过十四万之多死人也有2479例，形势严峻的美国医疗物资缺乏、医疗体系在接近极限，随着疫情的恶化，美国一直在隐藏还要面子，美国政客们时刻在给中国泼脏水、甚至想把美国的责任摔推给我们中国。至于疫情肆虐的美国会失控吗？我个人观点肯定经济大损失、因为美国是好战掠夺侵略从上世纪年代的称霸全球各地圈狗场基地发动战争就军火创收从越南阿富汗到中东大小战争无数次到9.11其实战争并没赢的美国都没失控？其次是脸皮比屁股还厚要面子的美国2019年9月份流感大爆发有3400万人受到感染，35万人住院治疗、死亡2万多人也没失控？:那么疫情如何会失控是经济损失巨大，世界警察束手无策罢了。
如何利用诊断检测来优化猪二型圆环病毒免疫接种
猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV)为圆环病毒科圆环病毒属的成员,属单股环状DNA病毒。该病毒无囊膜,具20面体,平均直径17nm,不具备血凝活性,可抵抗pH值3的酸性环境,能在vero细胞中生长繁殖,但不产生细胞病变。根据PCV的致病性、抗原性或核苷酸序列,可将PCV分为两个型,即PCV-1和PCV-2。PCV-1无致病性,广泛存在于猪群中[1-2]。
具致病性的PCV-2能引起多种疾病综合症,如能引起仔猪断奶后多系统衰竭综合症(PMWS)、猪皮炎和肾炎综合症、猪增生性坏死性间质性肺炎等,能与弓形体、附红细胞体混合感染,同时能加剧诸如猪繁殖与呼吸综合症、猪细小病毒病等的发生和流行[1]
。PCV-2广泛存在于世界各地,对有些国家和地区养猪业造成的危害特别严重。
目前,诊断该病的方法虽多,但速度较慢,而PCR技术可以在短时间内诊断出疾病。笔者根据GenBank中的PCV-2序列设计出特异性引物,建立猪圆环病毒2型地方分离株的PCR诊断方法,以期为快速诊断猪圆环病毒病提供参考。1材料与方法
1.1毒株猪圆环病毒2型(PCV-2)阳性病料由河南科技学院兽医院提供(经ELISA检测确认为阳性);猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PPV)、猪流感病毒(SIV)均由河南科技学院预防兽医学实验室提供。1.2工具酶和主要试剂TaqDNA聚合酶、dNTPs、LadderMarker、蛋白酶K均购自TaKaRa公司,SDS、饱和酚、氯仿、无水乙醇均购自华美生物工程有限公司。
1.3引物设计与合成参照GenBank上发表的20株PCV-2
的核苷酸序列,通过引物设计序列软件Primier5.0设计1对引物,上游引物为:5c-GGAGTCTGGTGACCGTTGC-3c;下游引物
为:5c-CTTCCTCCGTGGATTGTTCT-3c,引物由上海生物工程有限公司合成。
1.4PCV-2DNA模板的制备[3]
取部分病料0.5~2.0g,研磨并用Hank.s液(pH值7.2~7.4)稀释成1B3乳剂,反复冻融3次以上后,8000r/min10min,取上清液于-20e保存备用。取病料上清液500Ll,加入10%SDS50Ll,蛋白酶K20Ll,混匀后55e水浴1h。加800Ll苯酚混匀,12000r/min5min。取上清液,加苯酚、氯仿各300Ll,混匀,12000r/min5min。取上清液,加等量氯仿,12000r/min5min。小心取上清液,加2倍无水乙醇及1/10体积的NaAc,混匀后,置-20e沉淀30min以上,12000r/min15min。弃去上清液,然后加入200Ll75%酒精洗涤数次,37e烘干。加入30LlddH2O溶解,作为PCR反应的模板或-20e保存备用。
1.5PCR反应及条件的优化PCR反应的基本步骤按照5分子克隆实验指南6[4]
进行,对反应体系中的dNTP、酶、引物的浓度进行了优化。在25.00Ll体系中,10@Buffer2.50Ll,dNTP2.00Ll,模板1.00Ll,DNA聚合酶0.15Ll,引物各1.00Ll,d2H2O17.35Ll。PCR反应程序:94e2min;94e1min,50e1min,72e1min,30个循环,72e10min;4e保存。1.6电泳检测在1%琼脂糖板(在50e左右时,加入3Ll染料GOODVIEW)上加入DL2000及PCR产物,电压为80V。电泳结束后于紫外灯下观察、拍照。1.7PCR的特异性实验将上述提取的PCV-2DNA和用Trizol试剂盒提取PRRSV、HCV、SIV的cDNA以及PPV的DNA进行PCR扩增,引物为上述所设计的PCV-2DNA的特异性引物,鉴定该方法的特异性。
1.8PCR的敏感性实验将所提取的DNA用紫外分光光度计在260nm处进行快速测定,核酸含量约为50ng,然后用灭菌双蒸水进行10、20、40、80、160倍的稀释,用上述实验确
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2008,36(16):6678-6679,6700责任编辑孙红忠责任校对卢瑶
定的PCR最佳反应条件进行PCR扩增。以出现阳性反应条带的模板用量为最高稀释倍数,推算可检出最低病毒含量。2结果与分析
2.1PCR条件的优化及电泳结果通过对PCR扩增条件的优化,得出各物质的最佳使用浓度:dNTP的终浓度为220pmol/ml,Taq酶的终浓度为0.1U/Ll,引物的终浓度为20pmol/Ll。
用优化的条件对从阳性病料中提取的DNA进行PCR扩增。将PCR反应后的产物在紫外灯下观察,结果见图1,在494bp处出现1条特异性条带,
?
与预期大小相符合。
注:M为DL2000;1为PCR产物。Note:M.DL2000;1.ProductofPCR.
图1PCR检测结果Fig.1TheresultsofPCRdetection
2.2PCR检测PCV-2的特异性应用所建立的方法同时
检测PCV-2、PRRSV、HCV、SIV、PPV,其中PCV-2检测为阳性,PRRSV、HCV、SIV、PPV检测均为阴性,未出现交叉反应,证明该方法具有良好的特异性,结果见图2
?
。
注:M为DL2000;1为PCV-2;2为PRRSV;3为HCV;4为SIV;5为PPV。
Note:M.DL2000;1.PCV-2;2.PRRSV;3.HCV;4.SIV;5.PPV.
图2特异性检测结果
Fig.2TheresultsofspecificdetectionbyPCR
2.3PCR检测PCV-2的敏感性将提取的DNA稀释后用上述PCR反应条件进行扩增,结果见图3,表明该PCR方法可检出1.25ng的模板DNA,具备较高的敏感性。3小结与讨论
3.1猪圆环病毒防治自1991年加拿大首次报道PMWS以来,许多国家相继报道此病,并开展了广泛深入的研究,证实PMWS的发生与PCV-2感染密切相关[5-6]
。PCV-2感染可导致猪发生先天性震颤及猪皮炎肾病综合症[1,3]。鉴于国内养猪规模的不断扩大及与国际养猪业交流日益加强,很难保
?
证猪群中没有PCV-2感染及其相关疾病的传入。因此,正确
诊断是预防猪圆环病毒病的关键。
注:M为DL2000;1为50.000ngDNA;2为5.000ngDNA;3为2.500
ngDNA;4为1.250ngDNA;5为0.625ngDNA;6为0.375ngDNA.
Note:M.DL2000;1.50.000ngDNA;2.5.000ngDNA;3.2.500ng
DNA;4.1.250ngDNA;5.0.625ngDNA;6.0.375ngDNA.
图3敏感性检测结果
Fig.3TheresultsofsensitivitydetectionbyPCR
到目前为止,虽然众多国外科研工作者对PCV及其所导致的各种疾病进行了大量的研究,并取得了不小的进展,但是,国内对PCV研究还处于起始阶段[10]。迄今为止,该病的
疫苗正处于实验阶段,市场上还没有商品化疫苗和特效药物防治该病,并且该病有时呈亚临床感染[7]。
由于该病原具有特殊性(动物携带病毒但不一定会发病),它主要侵害动物的免疫系统,导致其机体的免疫力下降,进而造成许多病原的继发感染。目前主要采取的措施是加强饲养管理,定期消毒,严防PPV、PRRSV等引起疾病,降低饲养密度,坚持自繁自养,全进全出,引种猪时应慎重,加强早期疑似感染猪的诊断与淘汰[8]。除此之外,应建立一种快速、特异、简便的检测方法,为控制PCV所致疾病的发生与流行提供技术保障。
3.2猪圆环病毒的实验室诊断实验室诊断PCV的方法有很多种。酶联免疫吸附实验(ELISA)具有重复性、特异性和敏感性较好的特点,适合于大规模的PCV-2抗体的快速诊断,同时可用于进出口检验检疫的初筛,但往往存在假阳性偏高的问题[9]。通常用来诊断PCV-2的ELISA方法包括间接ELISA、竞争ELISA和抗原捕获ELISA等。间接免疫荧光
实验(IFA)可用于猪圆环病毒感染的血清学普查[9],宜于检测细胞培养物中的PCV。原位核酸杂交(ISH)具有群特异
性,灵敏度较高,可以精确定位PCV在组织器官及其细胞中的部位,可用于检测临床病料和病理分析,但不能区分PCV-1和PCV-2。免疫组化实验(IHC)适合于病毒抗原在组织培养和机体细胞内生长定位的观察。来源于不同地区的PCV-2分离株,其基因组序列有差异,这种差异对PCV-2的诊断和研究有重要意义。已有学者利用此差异建立了PCV-RFLP方
法,以此来诊断PCV感染[10]
。
3.3PCR检测PCV-2通常情况下,病毒病的确诊均需进行病毒分离。但由于PCV的病毒粒子很小(只有17nm),在细胞上不产生细胞病变,且需将PCV盲传多代才能使病毒有效增殖[2]。因此,病毒分离费力、耗时,不适于此病的快速诊断。国外已有多种市售诊断试剂盒,如ELISA、间接免疫荧光
后备母猪需要打水肿疫苗吗需要注意什么
我们都知道，水肿病疫苗在预防仔猪水肿病上的效果是十分理想的。但在兽医临床中，经常碰到农户将水肿病疫苗购买回去后就打，打过之后就认为万事大吉，可是，有相当一部分的农户的仔猪仍会发生水肿病，这是什么原因呢？笔者经过对数百例的此类情况进行深入研究，发现这一现象与防疫方法和技巧有直接的关系。下面就总结有关水肿病疫苗的防疫方法和技巧。一、防疫的最佳时间及超过最佳时间后的计量技巧仔猪水肿病疫苗的最佳防疫时间是14～18日龄。在此期内，每头仔猪仅需肌肉注射0.5～1.0ml的水肿病疫苗。如果超过18日龄，则要根据仔猪的大小适当增加用量（一月龄以上的仔猪则需肌肉注射2～3ml/头）。二、防疫前的注意事项防疫前应注意仔猪全部健康。如果有一部分仔猪不健康（如发热仔猪肺炎副伤寒重症痢疾等）或在即将防疫的三天内用过抗生素的则应暂缓防疫，以免加重病情或加重免疫反应应激甚至导致免疫失败。如果母猪在怀孕87～93天结合使用仔猪腹泻基因工程k88K99疫苗，仔猪在3日龄、7日龄分别注射1ml/头的牲血素，则水肿病疫苗的防疫效果更佳。三、防疫后的注意事项1、防疫后应给予易消化的全价饲料，并给予一定的洗净的青绿多汁饲料，同时给予充分的休息，并保持圈舍的清洁。2、防疫后可在饲料中给予免疫促进剂，如盐酸左旋咪唑片（低剂量2.0～3.0ml/kg）VitC片、VitAD3E粉、亚Se～VE粉等，以提高抗体水平。3、如免疫后的14日内发生痢疾，则应口服给予肠道不易吸收的抗肠道感染药品（如庆大、黄连素等），否则应重新注射水肿病疫苗。在免疫后的14日内应避免使用肾上腺皮质激素类（如地塞米松可的松）、丁公藤、氯霉素类等具有免疫抑制作用的药物。以避免免疫失效。
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